Ultrack и inTRACKtive: мощная пара инструментов для отслеживания клеток в процессе эмбрионального развития

Современные микроскопы позволяют учёным снимать видео, на которых можно наблюдать развитие эмбрионов в реальном времени. Однако превратить эти захватывающие изображения в чёткие и точные траектории движения каждой клетки, занимающей своё место в развивающемся организме, невероятно сложно.

Трудность заключается в том, что клетки движутся, делятся, а иногда и вовсе исчезают, формируя ткани и органы, которые будут составлять функционирующее взрослое животное.

Используя ядра клеток в качестве ориентиров, учёные должны определить границы каждой клетки на видеокадре — этот процесс называется сегментацией, а затем отследить клетки от одного видеокадра к другому.

В журнале Nature Methods учёные из Chan Zuckerberg Biohub в Сан-Франциско представили Ultrack — платформу для отслеживания клеток, которая может работать как с несколькими клетками в лабораторной посуде, так и с целыми эмбрионами на трёхмерных видео.

Ultrack особенно эффективен при отслеживании клеток всего эмбриона по сравнению с другими инструментами, участвующими в Cell Tracking Challenge — международной инициативе по сравнению инструментов.

«Легко отслеживать в 2D или несколько клеток, но Ultrack расширяет возможности в очень сложных сценариях, таких как 3D или полные эмбрионы», — говорит Лоик Руайе, директор по визуализации искусственного интеллекта в San Francisco Biohub и старший автор статьи. «Это очень быстро и хорошо масштабируется, но также имеет множество практических функций, облегчающих использование».

Как работает Ultrack

Алгоритмы отслеживания клеток традиционно выполняют свою задачу в два этапа: сначала сегментируют клетки в каждом кадре видео, а затем связывают одни и те же клетки между кадрами.

Ахиллесова пята этого подхода — первый этап, определение всех клеток на большом, размытом трёхмерном микроскопическом изображении. Необходимо определить, является ли то, что кажется одной большой клеткой в одном кадре видео, на самом деле несколькими клетками, проходящими друг мимо друга, или двумя клетками, которые недавно разделились.

Ultrack работает умнее, а не усерднее; он решает задачу отслеживания, одновременно решая две задачи — сегментацию и связывание.

Каждый раз, когда Ultrack проверяет потенциальную область в кадре, алгоритм строит так называемую ультраметрическую контурную карту — иерархию границ, где контуры возможных клеток представлены как композиция от более грубых к более тонким разделам.

Чтобы определить, какая граница клетки является правильной, Ultrack рассматривает все кадры, выбирая границы клеток (сегменты), которые наиболее последовательны во времени при соединении с соседними кадрами (связывание).

Этот способ мышления похож на то, как вы можете определить, является ли облако в небе одной большой структурой или двумя меньшими облаками, проходящими друг мимо друга. Ваш мозг определяет границы облаков, сравнивая более крупную структуру с двумя маленькими облаками, которые вы видели до и после — движущимися вместе, а затем в разные стороны.

Ultrack упрощает этот процесс ещё больше, рассматривая только сценарии сегментации, которые следуют правилам клеточной биологии — например, тот факт, что клетки делятся, но обычно не сливаются и не совершают резких прыжков из одного места в другое.

Такой эффективный подход не только экономит часы вычислений, но и приводит к уменьшению количества ошибок отслеживания, а значит, исследователи тратят меньше времени на исправление ошибок вручную.

«Он делает всё это без необходимости переобучения моделей глубокого обучения на каждом новом наборе данных, что является серьёзным препятствием для многих лабораторий», — говорит учёный из Biohub SF Жордау Брагантини, первый автор статьи.

Чтобы оценить производительность Ultrack в отслеживании развития органов, команда выбрала в качестве модельной системы нейромаст данио-рерио — механосенсорный орган, который помогает рыбам ориентироваться. Используя рекомендации Cell Tracking Challenge, Ultrack достиг почти идеальной точности.

А для создания Zebrahub — атласа клеток данио-рерио, опубликованного в Cell, команда Роера использовала Ultrack для реконструкции траекторий развития нескольких эмбрионов. Другие учёные из Biohub используют Ultrack для изучения таких вещей, как иммунная система данио-рерио.

inTRACKtive: инструмент для исследования больших наборов данных о слежении за клетками

Чтобы упростить изучение огромных наборов данных о слежении за клетками из Ultrack, команда Роера в сотрудничестве с коллегами из Chan Zuckerberg Initiative во главе с Чи-Ли Чиу разработала инновационный инструмент, который они называют inTRACKtive.

Используя интуитивно понятный браузерный интерфейс inTRACKtive, пользователи могут вращать эмбрионы в трёхмерном пространстве, выбирать группы клеток и следить за их траекториями для более глубокого анализа, ускорять или замедлять процессы развития и даже видеть события в обратном порядке.

Команда Роера также загрузила наборы данных из пяти других модельных видов (собранные в сообществе световых листов) — включая мышь, C. elegans и асцидию — для создания Виртуального зоопарка эмбрионов, в котором пользователи могут использовать inTRACKtive для изучения наборов данных. Поскольку inTRACKtive работает в любом браузере, пользователи могут интерактивно работать с наборами данных с ноутбука, настольного компьютера и даже с телефона.

«Мы призываем исследователей внести свой вклад в Виртуальный зоопарк эмбрионов, представив свои собственные наборы данных о целых эмбрионах других видов. Вклады помогут ресурсу расти, создавая всеобъемлющий репозиторий данных об эмбриональном развитии разных организмов», — говорит Хуэйбен.

«Далее мы планируем расширить возможности inTRACKtive за счёт интеграции данных визуализации наряду с результатами отслеживания клеток. Это позволит создавать ещё более богатые визуализации, объединяя поведение клеток и развитие тканей с живой микроскопией».

Предоставлено Chan Zuckerberg Biohub

Источник

Другие новости по теме

Другие новости на сайте